Aplikasi 6 BAP untuk Anggrek: Panduan Lengkap dan Dosis Tepat

Pendahuluan: Peran Hormon dalam Kehidupan Anggrek

Anggrek, dengan keragaman dan keindahannya yang memukau, merupakan salah satu keluarga tanaman terbesar dan paling bernilai di dunia hortikultura. Kunci untuk perbanyakan massal, induksi percabangan, dan pengendalian pembungaan anggrek terletak pada pemahaman dan manipulasi Regulator Pertumbuhan Tanaman (RPT) atau sering disebut hormon tanaman. Di antara berbagai kelas RPT, sitokinin memegang peranan vital, terutama dalam memicu pembelahan sel dan diferensiasi tunas.

Salah satu sitokinin sintetik yang paling efektif dan umum digunakan dalam kultur jaringan dan budidaya anggrek adalah 6-Benzylaminopurine (6-BAP), kadang disebut juga Benzyladenine (BA). Penggunaan 6-BAP adalah fondasi utama dalam teknik perbanyakan vegetatif modern, baik di laboratorium kultur jaringan (in vitro) maupun aplikasi langsung pada tanaman induk (in vivo) untuk memproduksi anakan atau 'keiki'. Pemahaman yang mendalam tentang mekanisme aksi, dosis yang tepat, dan teknik aplikasinya adalah pengetahuan esensial bagi setiap pegiat anggrek yang serius.

Apa Itu 6-BAP (6-Benzylaminopurine)?

6-BAP adalah sitokinin sintetik generasi pertama yang memiliki efektivitas tinggi dalam mendorong mitosis (pembelahan sel) dan sitokinesis. Secara kimiawi, 6-BAP adalah derivat purin yang secara struktural mirip dengan adenine, salah satu basis nitrogen dalam DNA. Fungsi utamanya di dalam sel tanaman adalah memecah dormansi kuncup lateral, merangsang pembentukan tunas samping, dan menunda penuaan (senescence) jaringan.

Berbeda dengan hormon alami seperti auksin yang cenderung didistribusikan dari ujung batang (apical), sitokinin, khususnya 6-BAP, bekerja untuk menghilangkan dominansi apikal yang dipertahankan oleh auksin. Dengan kata lain, aplikasi 6-BAP memungkinkan kuncup-kuncup yang terhambat pertumbuhannya di sepanjang batang atau nodus untuk aktif dan berkembang menjadi tunas baru atau anakan yang mandiri (keiki). Efek ini sangat krusial dalam perbanyakan anggrek monopodial seperti Phalaenopsis dan simpodial seperti Dendrobium dan Cattleya.

Mekanisme Molekuler 6-BAP dan Interaksinya

Untuk mencapai hasil optimal, penting untuk memahami bahwa 6-BAP tidak bekerja sendiri. Efektivitasnya sangat bergantung pada rasio konsentrasinya terhadap auksin, hormon yang bertindak sebagai antagonis (penghambat) sitokinin dalam konteks diferensiasi sel. Rasio sitokinin-aukisin (C/A) yang tinggi akan mendorong pembentukan tunas atau pucuk (shoots), sementara rasio C/A yang rendah cenderung mendorong pembentukan akar (roots).

Sintesis dan Transduksi Sinyal Sitokinin

Sitokinin bekerja dengan mengikat reseptor khusus pada membran sel tanaman. Pengikatan 6-BAP memicu serangkaian peristiwa yang disebut transduksi sinyal. Secara sederhana, reseptor sitokinin, yang merupakan protein kinase, terfosforilasi. Fosfat ini kemudian dipindahkan ke protein penerima yang pada akhirnya memicu aktivasi gen-gen spesifik yang bertanggung jawab untuk pembelahan sel (siklus sel).

Dalam konteks anggrek, 6-BAP secara khusus mengaktifkan gen yang mengatur protein seperti Siklin (Cyclin) dan Kinase Ketergantungan Siklin (Cyclin-Dependent Kinases, CDKs), yang merupakan mesin utama untuk menggerakkan sel dari fase istirahat (G1) ke fase sintesis DNA (S) dan akhirnya fase mitosis (M). Inilah alasan mengapa aplikasi BAP menghasilkan proliferasi sel yang cepat dan terorganisasi, menghasilkan tunas atau protokormus (PLB) baru.

Peran dalam Dominansi Apikal

Dominansi apikal adalah fenomena di mana ujung batang utama (apikal meristem) tumbuh lebih kuat dan menekan pertumbuhan tunas lateral atau samping. Auksin, yang disintesis di ujung apikal dan diangkut ke bawah, adalah pemain kunci dalam menekan pertumbuhan tunas lateral. 6-BAP, ketika diaplikasikan secara lokal atau diserap oleh tanaman, melawan sinyal auksin ini. Dengan meningkatkan konsentrasi sitokinin di nodus lateral, dormansi kuncup dipecahkan, sehingga tunas samping dapat tumbuh, menghasilkan percabangan yang lebih padat atau pembentukan keiki yang diinginkan.

Anggrek memiliki sistem transport hormon yang sangat sensitif. Aplikasi 6-BAP yang berlebihan dapat membanjiri sistem ini, menyebabkan efek samping negatif seperti hiperhidrisitas (vitrifikasi) pada kultur jaringan, atau pertumbuhan tunas yang terdistorsi dan tidak sehat (fasciation) pada aplikasi in vivo. Kontrol dosis yang ketat sangat penting, bahkan perbedaan 0,1 mg/L dapat mengubah hasil akhir secara drastis.

Aplikasi 6-BAP dalam Perbanyakan Anggrek In Vitro

Perbanyakan in vitro (kultur jaringan) adalah metode perbanyakan anggrek secara massal yang paling efisien, dan 6-BAP adalah komponen esensial dalam media nutrisi. Dalam kultur jaringan, tujuan utama penggunaan 6-BAP adalah merangsang multiplikasi Protocorm-Like Bodies (PLB) atau multiplikasi tunas sekunder dari eksplan yang sudah ada.

Fase Multiplikasi (Perbanyakan)

Dalam protokol kultur jaringan, fase multiplikasi adalah saat media harus mengandung rasio sitokinin-aukisin yang sangat tinggi. 6-BAP adalah sitokinin pilihan utama karena stabilitasnya dan efisiensi biologi yang tinggi pada suhu sterilisasi (autoklaf).

Dosis Standar 6-BAP untuk Multiplikasi PLB

Konsentrasi optimal 6-BAP sangat bergantung pada genus dan spesies anggrek, serta jenis eksplan yang digunakan (misalnya, biji, ujung tunas, atau nodus). Namun, ada pedoman umum yang sering digunakan dalam media Murashige and Skoog (MS) termodifikasi atau media Knudson C (KC):

• Anggrek Monopodial (Phalaenopsis, Vanda): Untuk induksi PLB atau tunas dari ujung daun atau segmen batang, konsentrasi 6-BAP yang disarankan berkisar antara 1,0 mg/L hingga 3,0 mg/L. Konsentrasi yang lebih tinggi (di atas 3,5 mg/L) seringkali menghasilkan pertumbuhan yang terhambat atau terdistorsi (hyperhydricity).
• Anggrek Simpodial (Dendrobium, Cattleya): Untuk multiplikasi PLB atau tunas lateral, dosis yang umum digunakan sedikit lebih rendah, biasanya antara 0,5 mg/L hingga 2,0 mg/L. Dendrobium cenderung merespon baik pada batas bawah, sementara Cattleya mungkin memerlukan dosis sedikit lebih tinggi untuk memecah dormansi kuncup.
• PLB (Protocorm-Like Bodies): Ketika eksplan sudah berbentuk PLB (misalnya dari biji Cymbidium), dosis 6-BAP sering ditingkatkan menjadi 2,0 mg/L - 4,0 mg/L, dengan penambahan auksin rendah (seperti NAA pada 0,1 mg/L) untuk menjaga diferensiasi yang stabil.

Kompatibilitas dengan Auksin

Multiplikasi yang sukses memerlukan 6-BAP dikombinasikan dengan auksin, meskipun dalam jumlah minimal. Auksin yang umum digunakan adalah Naphthalene Acetic Acid (NAA) atau Indole-3-Butyric Acid (IBA). Kombinasi optimal biasanya menetapkan rasio BAP:Auksin sekitar 10:1 hingga 20:1. Misalnya, 2.0 mg/L 6-BAP dikombinasikan dengan 0.1 mg/L NAA. Auksin pada dosis rendah berfungsi untuk mengatur pembagian sel yang teratur dan mencegah sel menjadi tidak terdiferensiasi (kalus).

Fase Pra-Transplantasi (Rooting)

Paradoks sitokinin adalah bahwa sementara ia sangat baik untuk multiplikasi pucuk, ia sangat buruk untuk perakaran. Setelah fase multiplikasi selesai, eksplan harus dipindahkan ke media yang memiliki rasio C/A yang rendah (sitokinin rendah, auksin tinggi) atau bahkan media bebas sitokinin. Sisa 6-BAP yang tertinggal dalam jaringan dari fase sebelumnya dapat menghambat pembentukan akar. Oleh karena itu, penurunan atau penghilangan 6-BAP secara total adalah langkah penting sebelum transplantasi (aklimatisasi) ke media non-steril.

Beberapa protokol menyarankan penggunaan 6-BAP pada konsentrasi sangat rendah (0.05 mg/L) pada media perakaran bersama dengan auksin tinggi (misalnya IBA 1.0 mg/L) untuk memicu pertumbuhan akar yang lebih kompak, namun ini harus dilakukan dengan hati-hati. Umumnya, anggrek diaklimatisasi pada media tanpa BAP untuk memungkinkan pemulihan dominansi auksin yang diperlukan untuk perkembangan sistem akar yang kuat.

Induksi Keiki dengan 6-BAP: Aplikasi In Vivo

Aplikasi 6-BAP paling dikenal oleh penghobi anggrek adalah dalam bentuk ‘Keiki Paste’ atau pasta perangsang tunas. Metode ini melibatkan aplikasi sitokinin berkonsentrasi tinggi secara langsung pada kuncup dorman (tidur) pada tangkai bunga atau nodus batang untuk memecah dormansi dan memaksa pertumbuhan anakan vegetatif (keiki).

Formulasi Keiki Paste Berbasis 6-BAP

Keiki paste adalah formulasi yang dirancang untuk memastikan 6-BAP tetap pada area aplikasi dan diserap secara perlahan oleh jaringan tanaman. Komponen utamanya meliputi:

1. 6-BAP (Bahan Aktif): Biasanya dalam bentuk bubuk murni (kemurnian >95%).
2. Pelarut Organik (Solvent): Diperlukan untuk melarutkan 6-BAP, karena BAP tidak larut dalam air. Pelarut umum adalah Dimethyl Sulfoxide (DMSO) atau sejumlah kecil alkohol (etanol).
3. Basis Pasta (Carrier): Lanolin anhidrat atau petroleum jelly (vaselin) adalah basis yang paling sering digunakan karena sifatnya yang oklusif (menahan kelembaban) dan kemampuannya untuk melepaskan hormon secara lambat ke jaringan tanaman.

Konsentrasi Ideal untuk Keiki Paste

Konsentrasi BAP dalam keiki paste jauh lebih tinggi daripada yang digunakan dalam kultur jaringan, karena aplikasinya bersifat lokal dan hanya sebagian kecil hormon yang benar-benar diserap. Konsentrasi biasanya dinyatakan dalam bagian per juta (ppm) atau persentase berat (w/w).

• Konsentrasi Rendah (500 – 1000 ppm / 0.05% – 0.1%): Cocok untuk anggrek yang sensitif seperti beberapa varietas Vanda atau ketika tujuannya adalah merangsang beberapa keiki kecil tanpa risiko fasciation yang tinggi.
• Konsentrasi Standar (1000 – 2000 ppm / 0.1% – 0.2%): Ini adalah rentang yang paling umum dan efektif untuk induksi keiki pada Phalaenopsis (anggrek bulan) dan Dendrobium. Anggrek ini memiliki respon yang kuat terhadap 6-BAP pada rentang ini.
• Konsentrasi Tinggi (2000 – 5000 ppm / 0.2% – 0.5%): Digunakan untuk anggrek yang lebih sulit diinduksi atau untuk perbanyakan cepat, tetapi meningkatkan risiko overdosis dan hasil pertumbuhan yang abnormal. Penggunaan 5000 ppm harus sangat hati-hati.

Teknik Aplikasi Keiki Paste pada Phalaenopsis

Aplikasi yang tepat sangat menentukan keberhasilan induksi keiki:

1. Identifikasi Nodus: Pilih nodus yang sehat dan matang pada tangkai bunga yang sudah selesai berbunga. Nodus adalah titik menebal di sepanjang tangkai bunga, di mana kuncup dorman berada di bawah lapisan pelindung (bract).
2. Pengupasan Bract: Bract (sisik pelindung) yang menutupi kuncup dorman harus dihilangkan dengan hati-hati menggunakan pinset steril atau pisau bedah. Pengupasan ini harus dilakukan tanpa merusak jaringan meristem di bawahnya. Pengupasan memungkinkan kontak langsung antara 6-BAP dan kuncup.
3. Aplikasi Pasta: Oleskan sedikit pasta 6-BAP (sebesar biji wijen) langsung ke area kuncup yang terbuka. Pastikan seluruh area kuncup dorman tertutup. Jangan mengaplikasikan pasta secara berlebihan; lapisan tipis sudah cukup.
4. Kondisi Lingkungan: Anggrek harus diletakkan pada lingkungan yang hangat (20°C - 28°C) dan lembap, namun dengan sirkulasi udara yang baik. Kelembaban tinggi membantu penyerapan hormon dan pertumbuhan keiki.

Perbandingan Hasil Keiki vs. Bunga

Penerapan 6-BAP pada kuncup dorman tidak selalu menjamin keiki; hasilnya dapat berupa tunas vegetatif (keiki) atau tunas generatif (bunga). Faktor-faktor yang memengaruhi hasilnya meliputi:

• Suhu: Suhu yang lebih hangat cenderung mendorong pembentukan tunas vegetatif (keiki). Suhu yang lebih dingin (terutama perbedaan suhu siang dan malam) cenderung menginduksi pembentukan bunga.
• Kondisi Tanaman: Tanaman yang sangat sehat dan muda cenderung menghasilkan keiki, sementara tanaman yang berada di bawah tekanan atau menjelang masa pembungaan alaminya mungkin akan menghasilkan bunga.
• Konsentrasi Auksin Endogen: Jika kuncup memiliki kadar auksin endogen yang tinggi (misalnya, kuncup yang sangat dekat dengan ujung tangkai), maka diperlukan konsentrasi 6-BAP yang lebih tinggi untuk memecahkan dominansi apikal dan menghasilkan keiki.

Metode Penghitungan Dosis dan Preparasi 6-BAP

Keberhasilan aplikasi 6-BAP bergantung sepenuhnya pada akurasi dosis. Kesalahan kecil dalam pengukuran dapat menyebabkan toksisitas atau sebaliknya, tidak adanya respons. Preparasi 6-BAP berbeda antara aplikasi in vitro (mg/L) dan in vivo (ppm/%).

Konversi Satuan: ppm, mg/L, dan Persen

Untuk menghindari kebingungan, pemahaman konversi satuan sangat penting:

• 1 mg/L (milligram per Liter) setara dengan 1 ppm (part per million) jika pelarutnya adalah air. Ini adalah satuan standar untuk media kultur jaringan.
• 1% (persen berat/volume) setara dengan 10,000 ppm.

Jika kita ingin membuat larutan 6-BAP 2.0 mg/L untuk kultur jaringan:

Dibutuhkan 2 miligram 6-BAP padat dilarutkan dalam 1 liter air yang sudah dimurnikan (misalnya air suling atau deionisasi).

Persiapan Larutan Stok untuk Kultur Jaringan

Karena dosis yang dibutuhkan sangat kecil (misalnya, 2.0 mg), menimbang langsung seringkali tidak akurat. Oleh karena itu, larutan stok (stock solution) yang terkonsentrasi perlu dibuat terlebih dahulu. Larutan stok standar biasanya 100x atau 1000x dari konsentrasi kerja akhir.

1. Larutan Stok 1000 mg/L (1 g/L): Timbang 1 gram (1000 mg) bubuk 6-BAP murni.
2. Pelarutan: 6-BAP tidak larut dalam air. Larutkan BAP dalam sedikit pelarut organik, biasanya 1N NaOH (Natrium Hidroksida) atau sejumlah kecil alkohol 95% hingga larut sempurna.
3. Penambahan Volume: Tambahkan air deionisasi hingga total volume mencapai 1 liter. Simpan larutan stok ini pada suhu dingin (4°C) dan gelap.

Untuk membuat 1 liter media kultur jaringan dengan konsentrasi kerja 2.0 mg/L, Anda hanya perlu mengambil 2.0 ml dari larutan stok 1000 mg/L, dan menambahkannya ke media sebelum sterilisasi.

Preparasi Keiki Paste (In Vivo)

Keiki paste membutuhkan formulasi berbasis massa. Untuk membuat 10 gram Keiki Paste dengan konsentrasi 2000 ppm (0.2%):

1. Kebutuhan 6-BAP: 0.2% dari 10 gram = (0.2 / 100) * 10 gram = 0.02 gram = 20 miligram BAP.
2. Pelarutan Awal: Larutkan 20 mg bubuk 6-BAP murni dalam 0.5 ml DMSO (Dimethyl Sulfoxide) untuk memastikan homogenitas dan penyerapan yang optimal oleh tanaman. DMSO membantu BAP melewati lapisan kutikula tanaman.
3. Pencampuran Basis: Campurkan larutan BAP-DMSO tersebut dengan 9.5 ml basis pasta (Lanolin atau Petroleum Jelly) secara menyeluruh hingga pasta tercampur sempurna dan homogen.
4. Penyimpanan: Simpan pasta dalam wadah kedap udara, di tempat yang sejuk dan gelap untuk menjaga stabilitas hormon.

Penggunaan DMSO harus sangat dibatasi dalam pasta karena pada konsentrasi tinggi dapat menjadi fitotoksik (meracuni tanaman). Jumlah kecil (di bawah 5% dari total volume) umumnya aman dan efektif sebagai agen penetrasi.

Pengelolaan Risiko dan Efek Samping 6-BAP

Meskipun 6-BAP adalah alat yang sangat kuat, penggunaannya yang tidak tepat membawa risiko signifikan, baik bagi tanaman maupun operator. Memahami batas toksisitas dan efek samping adalah kunci untuk budidaya anggrek yang bertanggung jawab.

Toksisitas (Overdosis) pada Tanaman In Vivo

Jika keiki paste diaplikasikan terlalu banyak atau konsentrasinya terlalu tinggi, efek samping berikut dapat terjadi:

• Fasciation (Pertumbuhan Terdistorsi): Kuncup yang terstimulasi tumbuh secara tidak teratur, seringkali melebar dan rata (flattened), bukan bulat normal. Ini adalah tanda khas konsentrasi sitokinin yang terlalu tinggi, menyebabkan pembelahan sel yang tidak terorganisir.
• Inhibisi Perakaran: Keiki yang berhasil tumbuh mungkin gagal membentuk akar karena sitokinin memiliki efek penghambatan kuat terhadap auksin, yang diperlukan untuk inisiasi akar. Keiki harus dipisahkan hanya setelah memiliki setidaknya tiga akar yang sehat.
• Necrosis (Kematian Jaringan Lokal): Konsentrasi yang ekstrem dapat menyebabkan jaringan di sekitar area aplikasi mati, ditandai dengan perubahan warna menjadi cokelat atau hitam.
• Keiki yang Tidak Mandiri: Tunas tumbuh namun lemah, etiolasi (memanjang tidak normal), dan tidak mampu berfotosintesis secara efisien.

Masalah Hiperhidrisitas pada Kultur Jaringan

Dalam lingkungan in vitro, 6-BAP yang berlebihan dapat menyebabkan Hiperhidrisitas (atau Vitrifikasi). Kondisi ini membuat jaringan tanaman terlihat seperti berkaca, bengkak, dan transparan, dan sangat rentan terhadap infeksi dan kegagalan transplantasi. Hiperhidrisitas terjadi karena sitokinin mengubah permeabilitas membran sel dan osmoregulasi.

Untuk mengatasi atau mencegah hiperhidrisitas, teknisi kultur jaringan harus:

1. Menurunkan konsentrasi 6-BAP (solusi paling efektif).
2. Meningkatkan konsentrasi agar-agar atau zat pemadat (gelling agent) dalam media.
3. Menambahkan adsorben, seperti arang aktif, untuk menyerap kelebihan hormon.

Prosedur Keamanan dan Penanganan Kimia

6-BAP adalah bahan kimia yang memerlukan penanganan hati-hati. Meskipun dianggap relatif aman dibandingkan beberapa pestisida, kontak langsung dapat menyebabkan iritasi kulit dan mata, serta memiliki potensi efek endokrin (hormonal) pada manusia jika terpapar secara kronis.

• Peralatan Pelindung Diri (APD): Selalu gunakan sarung tangan, pelindung mata, dan masker debu saat menimbang bubuk 6-BAP atau membuat larutan stok.
• Ventilasi: Proses penimbangan dan pelarutan harus dilakukan di area berventilasi baik atau di dalam lemari asam (fume hood).
• Penyimpanan: Simpan 6-BAP murni di wadah tertutup rapat, jauh dari jangkauan anak-anak dan hewan peliharaan, di tempat yang sejuk, kering, dan gelap untuk menjaga integritas kimiawinya.
• Pembuangan Limbah: Limbah larutan dan sisa bubuk harus dibuang sesuai peraturan limbah kimia, tidak dibuang ke saluran air biasa.

Variasi Aplikasi 6-BAP Berdasarkan Genus Anggrek

Respons terhadap sitokinin sangat spesifik bagi setiap genus anggrek. Apa yang optimal untuk Phalaenopsis mungkin beracun bagi Paphiopedilum. Penyesuaian dosis dan metode aplikasi adalah kunci diversifikasi.

Phalaenopsis (Anggrek Bulan)

Phalaenopsis sangat responsif terhadap 6-BAP. Aplikasi keiki paste pada nodus tangkai bunga adalah metode perbanyakan vegetatif utamanya. Nodus paling produktif adalah yang berada di tengah hingga ujung tangkai, bukan nodus yang paling dekat dengan pangkal tanaman.

Rekomendasi Dosis In Vivo: 1500 – 2500 ppm pada kuncup nodus tangkai bunga yang sudah di kupas.

Fokus: Induksi keiki. Keiki yang tumbuh perlu dipisahkan setelah memiliki 2-3 akar sepanjang 3-5 cm. Aplikasi 6-BAP pada bagian pangkal tanaman untuk mendorong percabangan baru (basal keiki) juga dimungkinkan, namun hasilnya kurang konsisten dibandingkan pada tangkai bunga.

Dendrobium

Dendrobium secara alami mudah menghasilkan keiki, terutama pada kondisi stres. 6-BAP digunakan untuk meningkatkan jumlah keiki yang dihasilkan pada nodus batang tua (cane). 6-BAP dapat diaplikasikan dengan cara disemprot (injeksi) atau dioleskan pada nodus yang masih tertutup. Karena Dendrobium relatif lebih toleran, dosis paste bisa berada pada batas atas.

Rekomendasi Dosis In Vivo: 2000 – 3000 ppm pada nodus batang tua.

Fokus: Perbanyakan cepat dari batang vegetatif. Dalam kultur jaringan, Dendrobium memerlukan BAP lebih rendah (di bawah 2.0 mg/L) untuk multiplikasi PLB yang sehat.

Cattleya dan Anggrek Simpodial Lainnya

Cattleya, Oncidium, dan anggrek simpodial lainnya memiliki metode pertumbuhan yang berbeda, melibatkan pseudobulb dan rimpang (rhizome). Aplikasi 6-BAP sering difokuskan pada merangsang tunas baru (new lead) dari mata tunas dorman pada rimpang.

Metode Aplikasi: Pasta 6-BAP dioleskan pada mata tunas dorman di sepanjang rimpang (dekat dengan pseudobulb) yang sudah sedikit dilukai (scarified) untuk memfasilitasi penyerapan.

Tujuan: Meningkatkan percabangan rimpang (breaking dormancy of back bulbs) untuk mendapatkan tanaman yang lebih rimbun. Keberhasilan seringkali membutuhkan kombinasi waktu aplikasi yang tepat (sebelum dimulainya musim pertumbuhan baru).

Vanda dan Anggrek Monopodial Lainnya

Vanda seringkali sulit diperbanyak secara vegetatif. 6-BAP digunakan untuk merangsang basal keiki (keiki yang tumbuh di pangkal batang). Karena batangnya tebal dan berkayu, konsentrasi 6-BAP harus cukup tinggi, dan seringkali diperlukan goresan (scarification) yang lebih dalam pada batang di bawah daun terbawah untuk memecah lapisan epidermis.

Rekomendasi Dosis In Vivo: 2500 – 4000 ppm. Responnya lebih lambat dibandingkan Phalaenopsis.

Sinergi Hormon: 6-BAP dan Kombinasinya dengan Auxin

Penggunaan 6-BAP yang paling canggih melibatkan manipulasi rasio sitokinin/aukisin untuk mengontrol morfogenesis secara presisi. Dalam kultur jaringan, rasio ini adalah yang menentukan apakah eksplan akan membentuk tunas, akar, atau kalus (massa sel yang tidak terdiferensiasi).

Induksi Kalus dengan Rasio C/A Seimbang

Kalus seringkali dianggap sebagai tahap perantara yang tidak diinginkan dalam perbanyakan anggrek, tetapi dalam penelitian dan breeding, kalus digunakan sebagai sumber materi genetik yang dapat dimanipulasi. Untuk menginduksi kalus pada anggrek (misalnya dari eksplan daun atau akar), diperlukan rasio 6-BAP dan Auksin yang relatif seimbang, seringkali 1:1 hingga 2:1, dengan konsentrasi total yang cukup tinggi (misalnya, 2.0 mg/L 6-BAP dan 1.0 mg/L 2,4-D atau NAA).

Peran Auksin dalam Keiki Paste (In Vivo)

Meskipun Keiki Paste tradisional hanya mengandung BAP, beberapa formulasi komersial menambahkan sejumlah kecil Auksin (misalnya, NAA atau IBA) untuk dua tujuan:

1. Mencegah Hyper-proliferasi: Auksin dosis rendah membantu menyeimbangkan pembelahan sel yang cepat oleh BAP, menghasilkan struktur tunas yang lebih terorganisir dan sehat.
2. Induksi Akar Dini: Auksin, bahkan dengan kadar BAP yang dominan, dapat memberi sinyal awal untuk inisiasi akar pada keiki yang baru tumbuh, mempersingkat waktu yang dibutuhkan keiki untuk mandiri.

Keiki paste dengan rasio BAP:NAA 10:1 (misalnya, 2000 ppm BAP dan 200 ppm NAA) seringkali menghasilkan keiki yang lebih seimbang dan cepat berakar, dibandingkan dengan BAP murni.

Faktor Lingkungan yang Mempengaruhi Efek 6-BAP

Efektivitas hormon 6-BAP tidak hanya tergantung pada dosis, tetapi juga pada lingkungan mikro tempat anggrek tumbuh. Pengabaian faktor lingkungan dapat mengurangi efektivitas hormon hingga 50%.

Cahaya dan Fotosintesis

Sitokinin membutuhkan energi metabolik yang cukup untuk mendorong pembelahan sel yang cepat. Tanaman yang terpapar cahaya rendah akan memiliki sedikit energi dan respons yang lambat terhadap 6-BAP. Setelah aplikasi BAP, anggrek harus ditempatkan di bawah cahaya terang, tetapi tidak langsung, untuk memastikan laju fotosintesis yang maksimal. Dalam kultur jaringan, intensitas cahaya (PPFD) yang lebih tinggi sering diperlukan selama fase multiplikasi.

Kelembaban dan Suhu

Kelembaban tinggi sangat penting untuk penyerapan 6-BAP melalui Keiki Paste. Di lingkungan kering, pasta dapat mengering dan membentuk kerak, menghambat difusi hormon ke jaringan meristem. Suhu juga vital; suhu yang terlalu rendah (di bawah 18°C) akan melambatkan metabolisme tanaman dan menunda respons terhadap BAP hingga berminggu-minggu.

Status Nutrisi Tanaman

Tanaman yang kekurangan nutrisi makro (terutama Nitrogen, Fosfor) atau mikro (Boron, Kalsium) tidak akan memiliki blok bangunan yang cukup untuk mendukung pembelahan sel yang diinduksi oleh 6-BAP. Pastikan anggrek dalam kondisi nutrisi optimal sebelum dan setelah aplikasi hormon. Pemupukan yang seimbang sangat diperlukan untuk mendukung pertumbuhan keiki menjadi tanaman dewasa yang sehat.

Batasan dan Alternatif Sitokinin

Meskipun 6-BAP adalah sitokinin paling populer, ia memiliki keterbatasan, terutama risiko fasciation dan toksisitas pada beberapa genus. Penelitian menunjukkan bahwa sitokinin lain mungkin lebih unggul untuk aplikasi tertentu:

• Kinetin: Sitokinin alami yang lebih lemah. Digunakan pada anggrek yang sangat sensitif atau ketika diinginkan multiplikasi yang lebih lambat dan terkontrol.
• Zeatin: Sitokinin alami yang paling efektif namun mahal. Menghasilkan pertumbuhan tunas dengan kualitas morfologi terbaik dan risiko hiperhidrisitas yang sangat rendah. Zeatin sering digunakan untuk penelitian anggrek hibrida baru yang bernilai tinggi.
• TDZ (Thidiazuron): Senyawa fenilurea dengan aktivitas sitokinin yang sangat kuat. TDZ seringkali terlalu kuat untuk kultur anggrek rutin, karena dapat memicu produksi kalus yang berlebihan dan pertumbuhan abnormal pada dosis yang sangat rendah (0.01 – 0.1 mg/L). TDZ digunakan untuk eksplan yang sangat sulit diinduksi.

Para ahli hortikultura sering bereksperimen dengan mengganti BAP dengan Zeatin atau Kinetin untuk memproduksi keiki atau tanaman in vitro yang memiliki kualitas dan daya tahan transplantasi yang lebih baik, meskipun dengan biaya yang lebih tinggi.

Kesimpulan: Masa Depan Aplikasi 6-BAP dalam Budidaya Anggrek

6-Benzylaminopurine (6-BAP) tetap menjadi pilar utama dalam teknik perbanyakan anggrek modern. Baik digunakan dalam media steril untuk perbanyakan massal, maupun dalam bentuk pasta untuk induksi keiki pada anggrek koleksi, 6-BAP menawarkan kemampuan unik untuk mengatasi dormansi kuncup dan mengontrol jalur diferensiasi sel.

Penggunaan yang efektif dari 6-BAP bukan sekadar mengoleskan pasta atau menambahkan bubuk ke media. Ini adalah ilmu tentang keseimbangan, membutuhkan pemahaman yang cermat tentang biokimia tanaman, sensitivitas genus, dan interaksi yang kompleks dengan auksin endogen (alami) serta faktor lingkungan eksternal seperti suhu dan cahaya.

Tantangan terbesar yang dihadapi pengguna 6-BAP adalah menghindari toksisitas yang bermanifestasi sebagai fasciation dan inhibisi perakaran. Oleh karena itu, prinsip utama adalah 'Less is More' – mulailah dengan dosis terendah yang terbukti efektif untuk spesies anggrek yang ditangani, dan selalu pantau respons tanaman dengan seksama. Dengan kontrol dosis yang tepat (terutama menjaga rasio sitokinin-aukisin yang dominan), 6-BAP memastikan keberlanjutan dan profitabilitas dalam industri anggrek, memungkinkan reproduksi klon yang cepat dan seragam dari varietas-varietas unggul.

Keberhasilan jangka panjang dalam memanfaatkan 6-BAP membutuhkan dokumentasi yang teliti. Setiap pengguna harus mencatat genus anggrek, konsentrasi 6-BAP yang digunakan, waktu aplikasi, dan hasil yang dicapai. Data empiris ini memungkinkan penyesuaian berkelanjutan pada protokol individu, yang pada akhirnya mengarah pada penguasaan penuh atas sitokinin yang revolusioner ini.

Dalam konteks perbanyakan in vitro, penelitian terus berlanjut untuk menemukan sitokinin baru atau kombinasi RPT yang dapat mengurangi kebutuhan akan 6-BAP dosis tinggi, terutama untuk mengurangi risiko hiperhidrisitas dan meningkatkan kualitas eksplan. Namun, karena efisiensi biaya dan ketersediaannya yang luas, 6-BAP akan terus mendominasi pasar hormon untuk kultur jaringan dan budidaya anggrek di seluruh dunia, menegaskan posisinya sebagai fondasi mutlak dalam agroteknologi anggrek.

Pemahaman yang mendalam tentang 6-BAP mencakup bukan hanya bagaimana ia bekerja, tetapi juga mengapa ia bekerja, menempatkan penggemar anggrek pada garis depan dalam upaya mereka untuk meningkatkan dan melestarikan keragaman genetika anggrek yang tak ternilai harganya. Ini adalah perjalanan berkelanjutan dalam biologi terapan yang menjanjikan bunga-bunga yang lebih indah dan hasil panen yang lebih melimpah.

Protokol penyiapan media kultur jaringan membutuhkan langkah-langkah sterilisasi yang ketat. Larutan stok 6-BAP yang telah disiapkan harus selalu disaring menggunakan filter steril berpori 0,22 mikrometer jika tidak dapat diautoklaf bersama media. Namun, 6-BAP adalah salah satu hormon yang stabil terhadap panas dan biasanya dapat diautoklaf bersama media MS atau KC, yang semakin menyederhanakan proses di laboratorium komersial. Stabilitas termal BAP merupakan keuntungan signifikan dibandingkan hormon alami seperti zeatin.

Aplikasi in vitro lanjutan juga mencakup induksi protocorm-like bodies (PLB) langsung dari jaringan daun atau segmen batang (thin cell layer technology). Teknik ini memaksimalkan potensi 6-BAP untuk memicu dediferensiasi sel dan kemudian rediferensiasi menjadi PLB baru. Dalam kasus ini, konsentrasi 6-BAP seringkali lebih tinggi (hingga 5.0 mg/L) pada fase inisiasi awal, diikuti oleh penurunan dosis saat PLB mulai berkembang biak. Perbedaan genus sangat kentara di sini: Dendrobium dan Phalaenopsis sangat adaptif, sementara Cattleya mungkin memerlukan kondisi stres osmotik atau penggunaan sitokinin lain untuk induksi PLB yang efisien.

Aspek penting lain dalam penggunaan 6-BAP adalah waktu aplikasi. Untuk induksi keiki in vivo pada Phalaenopsis, aplikasi paling efektif adalah pada awal musim semi atau musim panas, ketika tanaman secara alami berada dalam fase pertumbuhan vegetatif aktif. Aplikasi pada musim gugur atau musim dingin sering kali menghasilkan tunas bunga alih-alih keiki, karena tanaman merespon sinyal fotoperiode dan suhu yang memicu fase generatif, yang mana BAP dapat saja memperkuat sinyal generatif tersebut jika rasio BAP/Auksin tidak cukup tinggi untuk mengalahkan dominansi generatif.

Dalam konteks penelitian, 6-BAP juga digunakan untuk mengatasi hambatan sterilitas benih pada spesies anggrek tertentu. Biji anggrek yang tidak berkecambah pada media Knudson C standar dapat diberi perlakuan pendahuluan dengan larutan BAP berkonsentrasi sangat rendah (misalnya 0.1 mg/L) untuk memecahkan dormansi embrio sebelum dipindahkan ke media perkecambahan utama yang diperkaya auksin. Teknik ini menunjukkan spektrum luas kegunaan 6-BAP, bukan hanya untuk multiplikasi pasca-perkecambahan, tetapi juga pada fase inisiasi perkecambahan asimbiotik itu sendiri.

Penggunaan berkelanjutan 6-BAP dosis tinggi selama beberapa siklus perbanyakan in vitro juga dapat menyebabkan apa yang disebut "habituation" atau kebiasaan hormon, di mana jaringan tanaman menjadi kurang responsif terhadap sitokinin. Fenomena ini memerlukan penggantian periodik sitokinin (misalnya, beralih ke Kinetin atau Zeatin selama satu siklus) atau penggunaan periode "puasa" sitokinin agar jaringan dapat mereset jalur sinyal hormonnya, memastikan respons yang optimal pada siklus multiplikasi berikutnya yang menggunakan 6-BAP.

Akhirnya, efisiensi penyerapan 6-BAP dalam Keiki Paste bergantung pada kualitas basis pasta. Basis lanolin yang murni dan anhidrat memberikan penyerapan terbaik karena kompatibel dengan membran lipid tanaman dan memiliki sifat oklusif yang unggul. Jika basis terlalu keras, penyerapan terhambat; jika terlalu cair (misalnya basis mengandung terlalu banyak air), BAP mungkin terdegradasi atau gagal berdifusi secara efektif. Keseimbangan dalam formulasi pasta adalah seni dan sains yang menyertai penggunaan 6-BAP yang berhasil.

Anggrek adalah tanaman yang menuntut presisi. Penggunaan 6-BAP adalah bukti bahwa dengan pengetahuan kimia dan botani yang memadai, kita dapat memanipulasi proses pertumbuhan alami untuk mencapai hasil hortikultura yang luar biasa, baik untuk tujuan komersial maupun hobi koleksi pribadi. Penguasaan 6-BAP adalah langkah maju yang signifikan dalam teknik perbanyakan anggrek.